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定量PCR檢測試劑盒實驗方法

瀏覽次數(shù):938發(fā)布日期:2022-10-27
  定量PCR檢測試劑盒常用于熒光免疫法中標(biāo)記抗原或抗體,亦可用于微環(huán)境,如表面活性劑膠束、雙分子膜、蛋白質(zhì)活性位點等處微觀特性的探測。通常要求探針的摩爾吸光系數(shù)大,熒光量子產(chǎn)率高;熒光發(fā)射波長處于長波且有較大的斯托克斯位移;用于免疫分析時,與抗原或抗體的結(jié)合不應(yīng)影響它們的活性。
 
  定量PCR檢測試劑盒實驗方法:
 
  1.取增菌液1ml加到l.5ml無菌離心管中,10,000rpm離心5min,棄去上清;加入50ulDNA提取液,充分混勻后沸水浴5min,13000rpm離心5min,取上清液進(jìn)行檢測或保存于-20C以待檢測。
 
  2.將PCR反應(yīng)液置室溫平衡,融化后取Taq酶,按2U/管加入Taq酶,即每個測試反應(yīng)體系配制為:PCR反應(yīng)液22.5ul+0.4u1Taq酶。
 
  3.加入模板:將保存在-20C的核酸提取物置室溫解凍,以13000rpm離心5min。陰、陽性對照使用前置室溫解凍。在每個PCR反應(yīng)管中分別加入步驟1中處理過的模板或陰、陽性對照各2u1,蓋好管蓋,置于PCR儀上,記錄相應(yīng)樣品號。
 
  4.上機(jī)擴(kuò)增、檢測區(qū):反應(yīng)條件為95C:3min,1個循環(huán);95C:5sec,60C:40sec(信號采集),40個循環(huán)。反應(yīng)體系設(shè)為25u1。對于多通道熒光PCR儀,信號采集時設(shè)定為Fam熒光素。
 
  定量PCR檢測試劑盒使用注意事項:
 
  1.本試劑盒僅用于體外檢測和研究用途,開始使用前請仔細(xì)閱讀本說明書全文。
 
  2.實驗必須嚴(yán)格分區(qū)操作:PCR前準(zhǔn)備區(qū)一一準(zhǔn)備實驗試劑;樣本處理區(qū)一一待測樣本、模板處理;檢測區(qū)一一PCR擴(kuò)增、檢測。
 
  3.有關(guān)實驗室管理規(guī)范請參照國家相關(guān)部門頒布的基因擴(kuò)增實驗室的管理規(guī)范執(zhí)行。
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